Inhibición parcial de dos genes que codifican para proteínas del empalmosoma en Giardia intestinalis / Partial inhibition of two genes that encode spliceosomal proteins in Giardia intestinalis

Introducción. Giardia intestinalis es un organismo tempranamente divergente en el que recientemente se demostró la presencia de intrones. La maquinaria responsable de la remoción de intrones en organismos eucariotas superiores es el empalmosoma, el cual está conformado por cinco ribonucleoproteínas, cada una de las cuales tiene un ARN pequeño nuclear, un set de siete proteínas Sm (B, D1, D2, D3, E, F y G) y varias proteínas específicas. En G. intestinalis se han identificado los genes de algunas proteínas del empalmosoma por bioinformática. Aunque se asume que este es el responsable del empalme en el parásito, su caracterización bioquímica no se ha hecho. Objetivo. Inhibir dos genes que codifican para proteínas del empalmosoma de G. intestinalis con el fin de determinar si esta inhibición afecta el crecimiento o el enquistamiento del parásito. Materiales y métodos. En un vector específico para G. intestinalis se clonaron secuencias antisentido de los genes que codifican para las proteínas SmB y SmD3 del empalmosoma del parásito. Posteriormente, se transfectó G. intestinalis con los vectores recombinantes y se seleccionaron aquellos parásitos que lo incorporaron. Se confirmó la disminución del mensajero mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real, y se evaluaron el crecimiento y el enquistamiento en parásitos silvestres y transfectados. Resultados. Se observó una disminución de 40 y 70 % en el ARNm de SmB y SmD3, respectivamente. El crecimiento y el enquistamiento no se vieron afectados en estos parásitos. Conclusión. La disminución de SmB y SmD3 no afectó al parásito, lo que indica que el empalmosoma sigue siendo funcional, o que el empalme no es una función vital del parásito.

Introduction. Giardia intestinalis is an early divergent organism that was recently shown to have introns. The machinery responsible for the removal of introns in higher eukaryotes is the spliceosome, which consists of five ribonucleoproteins. Each of these ribonucleoproteins has a small nuclear RNA, a set of seven Sm proteins (B, D1, D2, D3, E, F and G) and several specific proteins. Some genes that encode spliceosome proteins have been bioinformatically identified in the parasite genome. Although it is assumed that the spliceosome is responsible for splicing in this parasite, biochemical characterization is lacking. Objective. To inhibit two G. intestinalis spliceosome protein genes in order to determine whether this inhibition affects parasite growth or encystation. Materials and methods. Antisense sequences of the genes encoding the spliceosomal parasite proteins SmB and SmD3 were cloned into a specific G. intestinalis vector. G. intestinalis individuals were subsequently transfected with the recombinant vectors and those parasites that incorporated the vector were selected. A decrease in mRNA levels by real-time PCR was confirmed and the growth and encystation in wild and transfected parasites was assessed. Results. A decrease of 40% and 70% of SmB and SmD3 mRNA levels, respectively, was observed. Growth and encystation in these parasites were not affected. Conclusion. Decrease of SmB and SmD3 mRNA levels does not affect the parasite, indicating that the spliceosome remains functional or that splicing is not essential for parasite viability.

Contaminação parasitária em alfaces crespas (Lactuca sativa var. crispa), de cultivos tradicional e hidropônico, comercializadas em feiras livres do Rio de Janeiro (RJ) / Parasitological contamination in lettuces (Lactuca sativa var. crispa), from traditional and hydroponic cultivations, commercialized in free markets of Rio de Janeiro (RJ)

Foram analisadas por técnicas parasitológicas de sedimentação e de flutuação 100 amostras de alfaces crespas de duas feiras livres, da Zona Norte do Rio de Janeiro (RJ), sendo 50 de cultivo tradicional e 50 de cultivo hidropônico. Doze amostras (12 %) apresentaram positividade para formas evolutivas de helmintos ou protozoários de importância médico-veterinária, como cisto de amebídeo, oocisto de coccídio e ovos de helmintos da superfamília Ancylostomatoidea e a frequência de positividade foi similar nas amostras de cultivos tradicional e hidropônico. Detectou-se contaminação por organismos em vida livre, sem associação com as formas evolutivas de parasitas, em 85 % das amostras. A presença de contaminantes na maioria das amostras, com detecção de formas evolutivas de parasitas intestinais de seres humanos ou de outros animais, indica que estas hortaliças podem representar uma potencial fonte de contaminação para o ser humano, e serem inadequadas para o consumo sem a devida higienização.

Contaminação parasitária em alfaces crespas (Lactuca sativa var. crispa), de cultivos tradicional e hidropônico, comercializadas em feiras livres do Rio de Janeiro / Parasitological contamination in lettuces (Lactuca sativa var. crispa), from traditional and hydroponic cultivations, commercialized in free markets of Rio de Janeiro

Foram analisadas por técnicas parasitológicas de sedimentação e de flutuação 100 amostras de alfaces crespas de duas feiras livres, da Zona Norte do Rio de Janeiro (RJ), sendo 50 de cultivo tradicional e 50 de cultivo hidropônico. Doze amostras (12 %) apresentaram positividade para formas evolutivas de helmintos ou protozoários de importância médico-veterinária, como cisto de amebídeo, oocisto de coccídio e ovos de helmintos da superfamília Ancylostomatoidea e a frequência de positividade foi similar nas amostras de cultivos tradicional e hidropônico. Detectou-se contaminação por organismos em vida livre, sem associação com as formas evolutivas de parasitas, em 85 % das amostras. A presença de contaminantes na maioria das amostras, com detecção de formas evolutivas de parasitas intestinais de seres humanos ou de outros animais, indica que estas hortaliças podem representar uma potencial fonte de contaminação para o ser humano, e serem inadequadas para o consumo sem a devida higienização.

One hundred samples of lettuce were collected from two free markets in the North Zone of Rio deJaneiro, Brazil, being 50 samples of traditional cultivation and 50 of hydroponic one. These samples wereanalyzed by means of parasitological sedimentation and flotation techniques. Twelve (12 %) sampleswere positive for evolutionary forms of helminths or protozoa of medical and veterinary importance,as cyst of amoebids, oocyst of coccidian and eggs of helminths of Ancylostomatoidea superfamily, andsimilar frequency of positive samples was found among the lettuce samples of traditional and hydroponiccultivations. Contamination with free living organisms was detected, but without association with theevolving forms of parasites in 85 % of samples. The presence of contaminants in the majority of samples,with detection of evolutive forms of human or other animals intestinal parasites, indicate that thesevegetables may represent a potential source of contamination for humans, and they are unsuitable forconsumption before being properly disinfected.